2646-71-1 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸四钠盐 的介绍

2646-71-1 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸四钠盐

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制备方法一（仅供参考）

NADPH的分离纯化方法，包括以下步骤：

将NADPH粗品溶液采用0.45μm微孔滤膜进行过滤，得供试品溶液；将所述供试品溶液通过反相柱层析纯化，反相柱层析的介质为C18，颗粒度为 10μm，粒径为色谱柱为Sepax GP-C18，以10mM NaH2PO4缓冲液为流动相A，以体积分数为100％的甲醇为流动相B，先用体积分数为100％的甲醇进行活化洗脱30min，再用A：B的体积比为95％：5％的流动相进行平衡洗脱 35min，然后按照如下程序进行梯度洗脱：0-10min，A：B的体积比为95％：5％；10-40min，A：B的体积比为90％：10％；40-60min，A：B的体积比由90％：10％→40％：60％；60min，A：B的体积比为60％：40％，柱温为 15℃，流速为40mL/min，检测波长为260nm，HPLC检测，收集，浓缩，干燥，即得。

制备方法二（仅供参考）

一种固定化酶催化制备NADPH的工艺，包括如下步骤：

1)用磷酸氢二钾和磷酸二氢钾分别配置0.1mol/L和0.2mol/L的磷酸缓冲溶液(pH 6.8－7.2)，备用。

2)配置1.25mol/L的氢氧化钠溶液，备用。

3)将130g硅胶加入到300mL、0.2mol/L的磷酸缓冲溶液中浸泡12h；浸泡后，清洗硅 胶：去除上清液，将130g浸泡后的硅胶加入300mL、0.2mol/L的新鲜磷酸缓冲溶液，震荡 3min，静置2min，更换缓冲液，清洗硅胶的步骤重复4次。

4)将处理好的硅胶置于73g GDH溶液(14.6g GDH用0.1mol/L磷酸缓冲溶液稀释5 倍，GDH的比活力为600u/mg)中，并在25℃下吸附固定55min，得到固定化GDH。

GDH的固载率测定：采用考马斯亮蓝法，测出固定前游离酶含量、固定后上清液游 离酶含量，测出GDH的固载率为60％。

5)取200g葡萄糖和10g氧化型NADP+，用0.1mol/L磷酸缓冲溶液定容至1000mL，备 用。

6)取一烧杯向其中加入580mL上述混合溶液和步骤4中固定的GDH，于37℃下保温 搅拌反应，并滴加氢氧化钠溶液维持pH＝7.0。

7)实验表明，当反应时间为15min时，NADPH-Na4生成量为4.008g，15min后，NADPH- Na4的合成速率显著下降。